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生物正置熒光顯微鏡是***種通過激發(fā)熒光標(biāo)記樣本產(chǎn)生可見光信號，實現(xiàn)對生物樣本（如細(xì)胞、組織切片）微觀結(jié)構(gòu)高對比度、高特異性觀察的光學(xué)顯微鏡，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、病理學(xué)等領(lǐng)域。其核心特點是采用“正置”光路設(shè)計（光源從物鏡下方照射樣本，物鏡從上方觀察樣本），適合觀察培養(yǎng)皿、載玻片等常規(guī)生物樣本，兼具熒光成像的高靈敏度與正置結(jié)構(gòu)的操作便利性。

***、核心功能與技術(shù)原理

１．　核心功能

熒光成像：通過激發(fā)特定波長的光（如藍(lán)光、綠光）使樣本中的熒光染料或蛋白（如ＤＡＰＩ、ＦＩＴＣ、ＴＲＩＴＣ）發(fā)射特征性熒光信號，實現(xiàn)對特定細(xì)胞結(jié)構(gòu)（如細(xì)胞核、線粒體、細(xì)胞膜）或分子（如ＤＮＡ、蛋白質(zhì)）的定位與定量分析；

明場觀察：支持常規(guī)透射光照明，用于觀察未經(jīng)熒光標(biāo)記的樣本（如細(xì)胞形態(tài)、組織切片結(jié)構(gòu)）；

多通道成像：可同時激發(fā)多種熒光染料（如ＤＡＰＩ＋ＦＩＴＣ＋ＴＲＩＴＣ），通過濾光片組分離不同波長的熒光信號，實現(xiàn)多靶標(biāo)共定位分析；

圖像記錄與分析：配備高分辨率相機（如ＣＣＤ或ＣＭＯＳ），支持實時預(yù)覽、圖像采集及后期處理（如疊加多通道圖像、測量熒光強度）。

２．　技術(shù)原理

基于熒光標(biāo)記技術(shù)與光學(xué)濾波技術(shù)：

熒光標(biāo)記：樣本中的目標(biāo)分子（如ＤＮＡ、蛋白質(zhì)）預(yù)先結(jié)合熒光染料或表達(dá)熒光蛋白（如ＧＦＰ），當(dāng)受到特定波長激發(fā)光照射時，吸收能量躍遷至激發(fā)態(tài)，隨后釋放更長波長的熒光（斯托克斯位移）；

光學(xué)濾波：通過激發(fā)濾光片（選擇特定波長激發(fā)光）、二向色鏡（反射激發(fā)光／透射熒光）和發(fā)射濾光片（選擇特定波長熒光信號），實現(xiàn)激發(fā)光與熒光信號的高效分離，避免背景干擾；

正置光路：光源（如汞燈、ＬＥＤ）從物鏡下方照射樣本，熒光信號經(jīng)物鏡收集后傳遞至目鏡或相機，適合觀察載玻片、培養(yǎng)皿等常規(guī)生物樣本（與倒置顯微鏡的“物鏡在下”設(shè)計互補）。

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