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實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ儀是***種用于精確檢測和定量ＤＮＡ或ＲＮＡ的高科技設(shè)備，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)診斷、基因研究等領(lǐng)域。以下是關(guān)于實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ儀的詳細(xì)介紹：

***、技術(shù)原理

實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）通過在ＰＣＲ反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記的探針或染料，實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號(hào)的變化，從而定量分析目標(biāo)核酸的初始濃度。其核心原理包括：

熒光信號(hào)與ＰＣＲ擴(kuò)增同步：熒光強(qiáng)度隨ＤＮＡ擴(kuò)增呈指數(shù)增長，通過檢測熒光信號(hào)的累積，可推算目標(biāo)序列的初始拷貝數(shù)。

Ｃｔ值（循環(huán)閾值）：熒光信號(hào)達(dá)到預(yù)設(shè)閾值時(shí)的循環(huán)數(shù)，與初始模板量成反比（起始拷貝數(shù)越多，Ｃｔ值越?。?/span>

熒光檢測方法：

ＳＹＢＲ?。牵颍澹澹钊玖希悍翘禺愋越Y(jié)合雙鏈ＤＮＡ，信號(hào)與ＤＮＡ總量相關(guān)，需通過溶解曲線驗(yàn)證特異性。

ＴａｑＭａｎ探針：特異性探針，兩端標(biāo)記熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)，ＰＣＲ擴(kuò)增時(shí)探針被切割，釋放熒光信號(hào)。

分子信標(biāo)：發(fā)夾結(jié)構(gòu)探針，結(jié)合目標(biāo)序列后熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，產(chǎn)生信號(hào)。

二、核心組成與功能

熒光定量系統(tǒng)：

光學(xué)模塊：檢測熒光信號(hào)，支持多通道檢測（如賽默飛ＱＳ系列提供１－６個(gè)通道）。

溫控模塊：精確控制變性、退火、延伸的溫度變化（如ＱＳ５的溫控精度≤０．５℃）。

計(jì)算機(jī)與軟件：

實(shí)時(shí)采集數(shù)據(jù)并生成熒光－循環(huán)曲線。

自動(dòng)計(jì)算Ｃｔ值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，支持絕對(duì)定量（拷貝數(shù)）和相對(duì)定量（基因表達(dá)差異）。

反應(yīng)體系：

包含引物、熒光探針／染料、ＤＮＡ聚合酶、緩沖液等。

支持高通量檢測（如９６孔或３８４孔板）。

三、主要特點(diǎn)

高靈敏度與特異性：可檢測低至單拷貝的核酸，避免傳統(tǒng)ＰＣＲ的終點(diǎn)法污染風(fēng)險(xiǎn)。

快速高效：縮短檢測時(shí)間，部分設(shè)備（如卡尤迪Ｍｉｎｉ８　Ｐｌｕｓ）支持便攜現(xiàn)場檢測５。

多重檢測能力：支持多通道熒光，可同時(shí)檢測多個(gè)目標(biāo)基因（如ＱＳ６支持６色通道）２３。

自動(dòng)化分析：軟件自動(dòng)生成標(biāo)準(zhǔn)曲線、Ｃｔ值及定量結(jié)果，減少人為誤差。

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