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手工細胞計數(shù)是一種常用的方法，特別是在實驗室環(huán)境中。以下是使用細胞計數(shù)板進行手工細胞計數(shù)的詳細步驟：
準備工作
準備細胞懸液：確保細胞懸液均勻分散。如果是貼壁細胞，需要先用胰蛋白酶消化，然后重懸細胞。
準備細胞計數(shù)板：使用酒精棉球輕輕擦拭計數(shù)板表面和蓋玻片，確保其清潔無污染。
操作步驟
放置蓋玻片：將蓋玻片輕輕蓋在計數(shù)板的正中間，確保蓋玻片邊緣覆蓋住計數(shù)板上的凹槽。
加入細胞懸液：
使用移液器吸?。玻啊ˇ蹋碳毎麘乙骸?/p>
將移液器吸頭抵在蓋玻片的上邊緣或下邊緣，然后緩緩打出液體。液體會因為虹吸作用被吸入蓋玻片和計數(shù)板之間的空隙內(nèi)。
觀察細胞：
調(diào)整顯微鏡，使用１０倍物鏡觀察。
視野內(nèi)應能看到計數(shù)板的網(wǎng)格結構，通常計數(shù)板分為多個大方格，每個大方格又分為多個小方格。
計數(shù)步驟
選擇計數(shù)區(qū)域：通常選擇大方格中的２５個小方格進行計數(shù)。
計數(shù)細胞：
計數(shù)２５個小方格內(nèi)的細胞總數(shù)。
對于位于小方格邊線上的細胞，遵循“數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下”的原則，以避免重復計數(shù)。
計算細胞濃度：
使用公式：細胞濃度（個／ｍＬ）?。健。玻祩€格子內(nèi)的細胞總數(shù) × １０，０００。
計算細胞總數(shù)：
如果需要計算細胞總數(shù)，可以使用公式：細胞總數(shù) ＝ 重懸細胞的培養(yǎng)基體積（ｍＬ） × 細胞密度（個／ｍＬ）。
注意事項
細胞懸液的制備：確保細胞懸液徹底吹散為單細胞懸液，避免細胞團塊影響計數(shù)結果。
計數(shù)準確性：如果２５個格子的細胞總數(shù)小于１００，建議重新制備細胞懸液并再次計數(shù)。
稀釋細胞懸液：如果細胞濃度過高，可以在計數(shù)前適當稀釋細胞懸液，并在最終計算時考慮稀釋倍數(shù)。
示例計算
假設在２５個小方格內(nèi)計數(shù)到的細胞總數(shù)為２００個：
細胞濃度?。健。玻埃啊 痢。保?，０００?。健。?，０００，０００ 個／ｍＬ。
如果重懸細胞的培養(yǎng)基體積為１ ｍＬ，則細胞總數(shù) ＝?。薄。恚獭 痢。玻埃埃?，０００ 個／ｍＬ?。健。?，０００，０００ 個。
通過以上步驟，您可以準確地進行手工細胞計數(shù)。希望這些信息對您有所幫助！
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